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      N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒使用說明書

      日期:2023-05-17瀏覽:321次


      本試劑盒僅供研究使用。

      檢測范圍:                                                        96T

      1.5ng/L -65ng/L

       

      使用目的:

      本試劑盒用于測定土壤樣本中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)含量。

      實驗原理

      本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG水平。用純化的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入NAG,再與HRP標記的NAG抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過che底洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的NAG呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG濃度。

      操作步驟

      1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

      2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

      3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

      4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

      5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

      6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

      7. 溫育:操作同3。

      8. 洗滌:操作同5。

      9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

      10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

      11. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

      注意事項

      1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

      2濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

      3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

      4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

      5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

      6.底物請避光保存。

      7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

      8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

      9.本試劑不同批號組分不得混用。

      保存條件及有效期

      1試劑盒保存:;2-8。

      2.有效期:6個月

       


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